什么是稳定性指示方法(SIM)?

根据FDA指南(《药物分析程序及方法验证指导原则》,FDA 2000),稳定性指示方法(SIM)被定义为一种经过验证的多肽分析测试程序,能够正确而精准地测量原料药或成品药的活性成分,不含工艺杂质、辅料和降解产物。FDA建议所有的稳定性检测程序都应具有稳定性指示。稳定性指示方法的主要目的是监测稳定性研究的结果,以确保其安全性、有效性和质量。当调查质量控制流程中的趋势偏差(OOT)或检验结果偏差(OOS)的结果时,它也是一个强大的工具。

第一步:生成用于选择性测试方法的降解样品

但是,某些残留物可能会对哪种抗衡离子对产品的稳定性更好造成影响。多数情况下,具有游离巯基基团的多肽作为盐酸盐对潜在的氧化杂质更加稳定。

应力测试应生成具有代表性的样品用以评估原料药和成品药的稳定性,能提供关于可能的降解途径的信息并展示稳定性指示分析方法应用的力量。展示定量限(LoQ)与展示降解量的密切关系即是该SIM方法的LoD和LoQ的评估。正如ICH(人用药品注册技术要求国际协调会)的Q3B(R2)文件所阐明的,这些限值应与降解产品的报告、鉴定、资质证明密切相关。这些临界值是由原料药的成分百分比或降解产品的每日总摄入量(TDI)来决定的。

固态
  条件 时间
热度 60℃ 一个月
湿度 75%RH 一个月
光稳定性 3mm(粉状) 暴露和非暴露样品 (“控制”) 遵循ICH指南要求 (Q1B文件)
液态
  条件 时间
水解 0.1-1 Mol L-1 NaOH 数周;60℃
0.1-1 Mol L-1 HCL 数周;60℃
氧化 H2O2 3%(v/v) 24小时
光稳定性 暴露和非暴露样品 (“控制”) 遵循ICH指南要求 (Q1B文件)
热度 60℃ 一个月

表1“更常用的”强制降解研究条件

第二步:方法开发(操作与评估选择性和特异性)

液相色谱是开发、验证SIM最合适的技术。使用二极管陈列检测器和其它质谱仪,可以为SIM开发的工作人员提供最佳性能。其目标是通过改变流动相组成、检测波长和pH值来操纵选择性。可以说与流动相pH相关的是,液相色谱柱技术的进步让pH作为一种真正意义上的可选择工具运用到电离化合物的分离中变成可能。机械强度高、运作效率高并且能在较大的酸碱度范围内操作的立柱应成为首选。酸性物质在pH值低的环境中更容易保存,而碱性物质则在pH较高的条件下更容易留存(中性物质不受影响)。在传统的pH值范围内(pH 4 – 8),pH值的轻微改变将导致留存率的显著变化。所使用的色谱分析(如HPLC高效液相色谱法,或GC气相色谱法)、布置和检测器(如GC-FID气相色谱氢火焰离子化检测器、GC-MS气相色谱质谱联用仪、LC-DAD液相色谱二极管陈列检测器、LC-MS液相色谱质谱联用仪)都无疑是有用的工具。对于HPLC高效液相色谱分析,可以使用不同的色谱模式(正相或反相、离子对或HILIC亲水色谱)。另一个强大的工具是,LSD光散射检测器结合使用HPLC高效液相色谱仪来监测紫外/可见光区不吸收光的化合物。气相色谱只能在样品不发生额外热降解的情况下使用(进样口在高温下工作)。在实现峰纯度上,HPLC高效液相色谱分析与DAD二极管陈列检测器结合使用通常能得到合理的效果,主要与主活性成分的可靠测定有关。可以确保不与降解峰和其它杂质共洗脱。实际上,DAD检测器的主要特点是可以在一个峰值上收集的每个数据点收集波长范围内的光谱,并通过涉及多维向量代数的软件操作,来比较每个光谱以确定峰纯度。用这一方式,DAD检测器可以通过简单的叠加比较来区分不容易观察到的光谱和色谱的差异。但是DAD检测器有时会受限,光谱越相似,且相对吸光度越低,就越难区分共洗脱化合物。MS质谱检测则克服了许多这些限制。MS质谱可以根据所用仪器的类型,提供明确的峰纯度信息、准确分子量、结构和定量信息。在方法开发中,MS质谱也是从跟踪峰值变化到选择性操作非常有用的工具。MS检测器的不足之处在于不能操纵在药物分析流动相中频繁使用非易失性缓冲器。结合DAD检测与MS质谱于一个单一的仪器和软件平台可以为评估SIM开发的特异性提供所需某种类型的有价值的正交信息。在测定了峰纯度之后,事实上,降解产物的鉴别和质量平衡的测定是更为复杂的分析开发步骤,因为在大多数情况下,降解产物的商业参考标准是不可用的。

验证本身并不是一种高效的方法开发途径,所以应致力于研究方法中步骤的独特性,和应力分析样本的研究。验证程序可以从基于药典和/或ICH指南Q2B的方案开始。对于分析程序,检测存在于给定样品中的被分析物时,应考虑的典型的验证项目有:准确度、精密度(重复率和中间精密度)、特异性、检测和定量限、鲁棒性、线性和范围。